骨髓（suǐ）穿刺抽吸技術（shù）  

骨髓穿刺（cì）抽吸技術的早期發展主要集中在人類（lèi）醫學領域，隨後逐漸應用於動（dòng）物研究。最初的技術較為簡單，主要（yào）用於獲取骨髓樣本（běn）以進行（háng）血液學和病理學分析。隨著研究需求的增（zēng）加，骨髓（suǐ）穿（chuān）刺（cì）抽吸的技術逐漸（jiàn）得到了改進和優化，設備改進方麵引（yǐn）入了專用的（de）骨髓穿刺（cì）針，這些穿刺針具備更好的設計可以減少組織損（sǔn）傷和提高樣本質量，以及在操（cāo）作過程中引入（rù）嚴格的無菌技術以減少感染的風險。

骨髓穿刺技術不僅在醫學研究中得到廣泛（fàn）應用還擴（kuò）展到多個領域。藥物研發，評估新（xīn）藥（yào）對骨髓的影響，尤其是抗癌藥和免疫抑製藥（yào）物的研究中；毒理學（xué）研究（jiū）中，同樣需要研（yán）究有毒物質對骨髓的影響；此外，基（jī）因治療，通過獲取骨（gǔ）髓細胞（bāo）進行基因組研究和基因編輯實驗等都需要進行骨髓穿刺。本（běn）文將介紹實驗犬的骨髓穿（chuān）刺抽吸技術（shù）。

采集（jí）部位

對於（yú）犬，骨髓樣本通常從股骨轉子窩、肱骨近端或髂（qià）骨翼采集，其他部位包括胸骨、肋骨。如果（guǒ）骨盆和股骨區域含有豐富的脂肪組織，采集則會變得更具挑戰性。下文主要講述犬肱骨近端骨髓采集的操（cāo）作程序。

肱骨近端骨髓（suǐ）采集（jí）

材料和設備（bèi）

○ 無菌手（shǒu）套（tào）

○ 電動剪毛器和清潔溶液

○ 局部麻醉藥（如利多（duō）卡因、布比卡因）

○ 含有2.5% - 3%乙二胺（àn）四乙酸（suān）溶液（EDTA約2 mL）的培養皿

○ 玻璃顯微鏡載玻片

○ 顯微血細胞比容毛（máo）細血管（圖A），有毛細（xì）血管（guǎn）球

○ 11號手術刀片

○ 無菌紗布

○ 10或12ml注射器

○ 14G至18G帶針芯（xīn）的（de）骨髓針（圖B和C）

A：骨髓穿刺所需的材料和設備

B：帶蓋和針芯的穿刺針

C：已移除蓋和針芯的穿（chuān）刺針

操作步（bù）驟

1、在進行深度鎮（zhèn）靜或全身麻醉後，動物側臥位，修剪采集部位的（de）毛（máo）發，可以在采集（jí）部位皮下注（zhù）射（shè）局部麻醉劑（如（rú）利多卡因、布比卡因），采（cǎi）集（jí）部位無菌清洗。如圖1A。

圖1A：動物側臥位，采集部位的毛發已剔除。

2、打開並佩戴無菌手套。助理輔助將穿刺針、注射器和手術刀片打開並放入無菌區域，或將這些物品（pǐn）以無菌的方式遞給術者。使用10或12ml的注射器，在保持無菌的情況下，抽取（qǔ）約1ml的EDTA溶液。如圖1B 。

圖1B：從培養皿中抽取EDTA溶液

3、將注射器放置在無菌（jun1）區域內。移除穿（chuān）刺針的蓋子和針芯，通（tōng）過順時針旋轉確保針頭的防護裝置牢固地連（lián）接在針頭的基部。將含有EDTA的（de）注射器連接到針頭的頂部並（bìng）旋（xuán）緊。通過將EDTA噴回（huí）培養皿來灌注針頭，留下約0.5 mL的EDTA在注射器（qì）中（zhōng）。灌注時保持在培養皿（mǐn）上方，不要讓無菌針頭的尖端接觸培養皿，然後將（jiāng）注射器從針頭上移除（chú），置於無菌區域內。重新裝上針（zhēn）芯（xīn）和蓋子。注：在大型犬（quǎn）中，可以移除針頭防（fáng）護裝置，以方（fāng）便（biàn）進入髓腔。如圖1C。

圖1C：用EDTA溶液灌注穿刺（cì）針

4、觸摸並確定肱骨近端外側的平（píng）坦區域，位於大結（jié）節的遠端。確定肩胛骨（gǔ）和肱骨之間的肩關節，以確保不會（huì）誤采到該區域。在平坦區域正上方的皮膚上切開一個（gè）小口。如圖1D。

圖1D：在（zài）肱骨近端外側的平坦區域切開一個小口

5、牽拉皮膚，將針頭“彈入”切口，確保針頭已穿透深層皮下組織。重新確認肱骨（gǔ）近端外側的平坦區域，位於大結節的遠端。將針尖直接放在骨頭上，垂（chuí）直於平麵。以順時針和（hé）逆時針旋轉的方（fāng）式適度施（shī）加壓（yā）力，直至針頭穿透（tòu）近端骨皮質。穿透皮質後，減小（xiǎo）角度，使針頭朝向肘部，平行（háng）於髓腔。繼續扭轉，直到針完全嵌入骨內。如（rú）圖1E。

圖1E：穿刺針（zhēn）彈入切口

6、移除蓋子和針芯，並迅速連接含有EDTA的注（zhù）射器。抽吸至可見紅骨髓（2 ~ 5 mL足夠），並將內容物排出到培（péi）養皿。如圖1F。

圖（tú）1F：將骨髓吸入裝有EDTA的（de）注（zhù）射器

7、骨髓包（bāo）含在白色的針狀物中，表明穿刺成功。使用毛細管或帶有毛細管球或移液（yè）管球（qiú）的巴（bā）斯德移液管取出（chū）並排出這些顆粒，用於血塗片製備（bèi）。每（měi）片至少需要1個（gè）針狀物；然而，建議每張載玻（bō）片至少有3 ~ 5個較大的針狀物，以進行充分評估。任何剩餘的骨髓內容物都可以收集到EDTA管中，並與載玻片一起送往實驗室。如圖1G。

圖1G：使用巴斯德（dé）吸管（guǎn）取（qǔ）出顆（kē）粒以製備血（xuè）塗（tú）片

8、在動物恢複後給與鎮痛藥物，並根據需要繼續使用。

潛在的不良反應、緩解措施或治療方法

1、采樣部位感染，但這種情況很（hěn）少見

2、對軟組織如神經、肌肉和關節表（biǎo）麵的創傷

3、采（cǎi）樣（yàng）部位出血

4、術後疼痛

緩（huǎn）解措施

○ 密切注意無菌技術

○ 仔細辨別解剖標誌，準備骨骼/骨標本以正確找（zhǎo）到解剖標誌，避免對周圍組織造成意外創（chuàng）傷

○ 對采樣部位施加直接壓力，髓內出血不（bú）會引起大的問題，因為血液會迅速被吸收

○ 術後疼痛通常是短暫的，鎮（zhèn）痛藥用作鎮靜/麻醉的預藥（yào）通常是足（zú）夠的，但如果需要也可以在術後使用

小結

為了提高骨髓穿刺抽吸的（de）成功（gōng）率和樣本質量，必須（xū）製定全麵（miàn）的標準操作（zuò）程（chéng）序（SOP），涵（hán）蓋動物準備、麻醉管理、穿刺操作及樣本處理等（děng）各個環節（jiē），並對實驗人員進行（háng）係統且廣泛（fàn）的培訓。此外，實驗研究人員應持（chí）續優化和改進技（jì）術，精細化操作流程，提升（shēng）效率與準確性，從而為生物醫學研究提供高質量的樣本和可靠的數據支持。