C57BL/6小鼠是（shì）使用最廣（guǎng）泛的近交係小（xiǎo）鼠，被應用於免疫學（xué）、神經生物學、腫（zhǒng）瘤學等生命科學研究，同時（shí）也是基因工程（chéng）小鼠的最主要背景（jǐng）品係（xì）。在免疫學研究中，從C57BL/6小鼠脾（pí）髒中獲取免疫細胞是一種常規（guī）操作。

請想象以下場景：正在取小鼠脾髒的學生發現脾髒出現（xiàn）了黑色斑（bān）點（圖1），“老師，大事不好，我們的（de）小鼠怕是被感染了。你看，小鼠的脾髒壞死了，一端已經變黑了。”估計很（hěn）多（duō）動物設施管理（lǐ）者都會被驚（jīng）出一身冷汗。

筆者查閱了相關（guān）文獻並做了初（chū）步實驗，確定該現（xiàn）象是非白化小（xiǎo）鼠自身的色素在脾髒沉積的自然現象且與毛發生（shēng）長周期性（xìng）有關，對基礎免疫（yì）學（xué）實（shí）驗沒有影響。

01、PART

C57BL/6小鼠脾（pí）髒出現黑色斑點的（de）現（xiàn）象，首次報道（dào）要追溯到1967年，Weissman等人在上（shàng）免疫學實驗課時發現C57BL/Ka和C57BL/6小（xiǎo）鼠的一些脾髒上有黑色的斑點。C57BL/Ka×Balb/c F1代小鼠的（de）脾髒上也（yě）發現了黑色（sè）斑點，但是Balb/c小（xiǎo）鼠（白化小鼠）脾髒無黑色斑點。初（chū）步研究發現（xiàn）該現象沒有明顯的孟德爾遺傳規律。隨後（hòu）的實（shí）驗發現（xiàn）脾髒中的黑色斑點不能被普魯氏藍染色，排除（chú）了含鐵的色素。

另外可以用DOPA氧化酶染色，可以被過氧化（huà）氫漂白，說明脾髒黑色斑點中含有真黑色素（melanin）[1]。該現（xiàn）象加幾個實驗（yàn）組成的文章發表在（zài）Nature（發頂刊這麽容（róng）易嗎？有沒有被驚到）。文中Weissman等人（rén）討論了這些黑色素細胞可能是從其它組織遷移而來。

02、PART

1977年，Auriol C等人（rén）在對C57BL/10接種支（zhī）原體的實驗中也發現了這種現象，並排除（chú）了支原體（tǐ）感（gǎn）染的影響[2]。1989年，Veninga, T.S等人（rén）動用了電鏡等多種觀察（chá）手段，發現是脾髒紅髓中的巨噬細胞吞噬了色素顆粒[5]（圖2）。

1995年（nián），van der Heijden等人研究進一步認為脾髒黑色斑點主要是由真黑色素（melanin）造成的，脂褐質（zhì）（lipofuscin）或血鐵黃素（haemosiderin）不是造成（chéng）該現（xiàn）象的主要色素。

至此，對小鼠脾髒黑色斑點的（de）研（yán）究主要集中在切片鏡檢等光學（xué）形態（tài）學觀察手段（duàn）[4]。

03、PART

更深入的研究出現在2005年，從事色素研究的（de）Przemyslaw M. Plonka等人首次使（shǐ）用（yòng）電子順磁共振波譜（EPR）證明（míng）了C57BL/6脾髒黑斑含有真黑色素（melanin）。並且還發現脾髒黑斑（bān）現象與毛發周期之間的相關性（圖3），他們發現在小鼠毛發（fā）周期的退化期，存在多達50-80%的黑色素沉著脾髒，而在處於毛發周期（qī）深層休止期的小鼠中，黑色素變性脾髒的百分比約為15%。EPR觀察到的脾髒真黑色素與皮膚中發現的色素（毛囊黑色素細胞和發幹）不同。與皮膚色素相比，其功率（lǜ）飽和（hé）度和（hé）線寬揭示了順磁性中心的異質性，這表明色素存在部分降（jiàng）解[6]。

04、PART

2009年Przemyslaw M. Plonka已經成為通訊作者，他們實驗室延續了前麵（miàn）的研究（jiū），發現（xiàn）與年輕C57BL/6小鼠（shǔ）相比，老年（nián）C57BL/6小鼠沒有表現（xiàn）出肉眼可見的脾髒黑斑。認為小鼠的脾髒黑色素沉著現象一定（dìng）程度上與（yǔ）毛發周期同步的皮膚黑色素沉著有關，並且脾髒黑色素（sù）在小鼠一生中逐（zhú）漸降解。因此小鼠脾髒黑色素沉著可能是（shì）一種研究體內衰老和黑（hēi）色素（sù）降解機製的獨特現象[7]。

2015年Przemyslaw M. Plonka實驗室繼（jì）續（xù）發現脾髒黑色斑點也（yě）出現在129/SvJ野鼠色（agouti）小鼠上（圖4）。由於野鼠色agouti（agouti）表型（xíng）是小（xiǎo）型野生哺乳動物（如齧齒動物）的基本表型，對它（tā）們來說是一（yī）種偽（wěi）裝色。這說（shuō）明與毛發色素沉著相關（guān）的脾髒黑色（sè）斑點現象並不是一種僅在實驗室近交係小鼠中觀（guān）察到的奇異現象。這一現（xiàn）象也可（kě）能出現在野外動物上[3]。

有關小鼠毛色更詳盡深入的內容可參閱（yuè）本公眾號前文《小（xiǎo）鼠的毛色是如何形成的？》及《小鼠（shǔ）毛色變化的分子成因》。

筆者實驗（yàn）室經常做小（xiǎo）鼠胚胎移植實驗，需要用到大量C57BL/6（黑色）小（xiǎo）鼠和ICR（白化）小鼠。經過一段時間的觀察（chá），發現不同批次C57BL/6小鼠脾髒黑斑出（chū）現的平均概率在15%左右，無明顯遺傳規律（lǜ）。ICR小鼠脾髒無黑斑現象。

筆者通過HE染色切片，發現與正常脾（pí）髒相比，黑斑脾髒的紅髓、白髓、生發中心等結構完（wán）整，數（shù）量正常，無（wú）炎症和壞（huài）死現象（圖5）。黑斑脾髒中紅髓部分散落著明顯的黑色細（xì）胞。六胺銀染色結果顯示黑色斑塊形狀、大小完全不一致，可以排除（chú）微生物（wù）感染（圖5），與Veninga, T.S等人（rén）的實驗結果（guǒ）類似[5]。

筆者還檢測了黑斑脾髒的C57BL/6小鼠（shǔ）的血常規數據，並使用流式細胞（bāo）術檢測CD4+和CD8+陽性T細胞（bāo）的比例，發現與無黑斑脾髒小鼠相比無顯著差別（結果不（bú）顯示）。

小鼠脾髒黑（hēi）色斑點這種現象貌（mào）似沒有太大用處，目前可以確定小鼠基礎生理指標和一些基礎免疫學指標正常，對免疫學研究應沒有影響。但是否可（kě）以作為人（rén）類色素沉著症（zhèng）的（de）模型需要進一步研（yán）究考察。

參考文獻：

[1] Weissman, I., Genetic and histochemical studies on mouse spleen black spots. Nature, 1967. 215(5098): p. 315.

[2] Auriol C, Hill,., H. Georgis, and J. Breaden, Pigment in the spleen of C57BL/10ScSn and related mice. Experientia, 1977. 33(7): p. 954-5.

[3] Michalczyk-Wetula, D., J. Wieczorek, and P.M. Plonka, Splenic melanosis in agouti and black mice. Acta Biochimica Polonica, 2015. 62(3): p. 457-463.

[4] van der Heijden, A., et al., Spleen pigmentation in young C57BL mice is caused by accumulation of melanin. Lab Anim, 1995. 29(4): p. 459-63.

[5] Veninga, T.S., R.A. Wieringa, and H. Morse, Pigmented spleens in C57BL mice. Lab Anim, 1989. 23(1): p. 16-20.

[6] Plonka, P.M., et al., Splenic eumelanin differs from hair eumelanin in C57BL/6 mice. Acta Biochimica Polonica, 2005. 52(2): p. 433-441.

[7] Michalczyk, D., et al., Extradermal melanin transfer? Lack of macroscopic spleen melanization in old C57BL/6 mice with de-synchronized hair cycle. Acta Biochimica Polonica, 2009. 56(2): p. 343-353.