簡介

盡（jìn）管存在解（jiě）剖和生理上的差異，小鼠在研究人類（lèi）肺部疾病，包括急性（xìng）肺（fèi）損傷（ALI）和肺纖維化方麵仍具有極高的價值。治療方法（fǎ）是諸多肺部疾病研究的核心，其中口咽吸入法（OPA）已被廣泛用，但其缺點是部分藥劑（jì）可能被吞入胃腸道，從而導致給藥劑量的不準確；另一種是經氣管給藥，這涉及到在深度麻醉狀（zhuàng）態下切開氣（qì）管直接將藥物注入到呼吸（xī）道，然而，這種操作不僅因其侵入性和造成呼吸道損傷而不可取，還存在耗時過長，且操作者需要大量的訓練等問（wèn）題。

1999年，Brown等人發表研（yán）究論文描述了一（yī）種小鼠肺部直（zhí）接（jiē）插管的方法，後續（xù）也有其他幾篇論文描述了不同的小鼠（shǔ）肺部插管方法，但這種插管的主要問題是：當（dāng）插管導管接近氣（qì）管並（bìng）準備插入時，導管本身會阻（zǔ）擋光線，從而無法看（kàn）清需要插入的位置。

本文展示了如（rú）何簡單、低成本地消除這個可視化問題，從而確保在相對少的培訓或經驗下成功進行插管。

方法

準備（bèi）：

1、導管。對於20-35 g小鼠的插管，我們使用1或1.5英（yīng）寸長，20 g IV導管(BD Insylte, Sparks, MD或Jelco Optiva, Carlsbad, CA)。可以為每隻小鼠使用新的無菌導管，但導管也（yě）可以在消毒後用70%乙醇浸（jìn）泡過夜重複使用。盡管小鼠的咽部和氣管不是無菌的，但應遵（zūn）循適當的清潔（jié）程序，包括使用（yòng）無菌手套和器械。

2、光纖電纜。我（wǒ）們（men）使用約70厘米長、0.5毫米粗的Edmund Optics光纜，但（dàn）長（zhǎng）度（dù）不是決定性的因素（sù）。重要的是要確（què）保纖維的（de）邊緣是平滑的（de），因為（wéi）在用（yòng）剃刀切割電纜後，邊緣相對較銳利，很容易刺穿氣管壁。然（rán）而隻需將光纖端部放在（zài）1000粒度的砂紙上，就（jiù）可以非（fēi）常容（róng）易（yì）地打磨平這個邊（biān）緣。另一端插（chā）入（rù）橡膠塞中。最簡便的方法是先用18號針通過橡膠塞，插入光纖通過針孔（kǒng），然（rán）後撤出針。橡膠塞連接150瓦鹵素光源。重要的是要確保使用矽膠橡膠塞(或其他耐熱材（cái）料（liào）)，因為普通橡膠或軟木在靠近熱光源時可（kě）能會燃燒。

插管（guǎn）：

1、參見圖1和2。通過一（yī）段短矽橡膠管(ID≈0.8 mm×OD 4mm, Cole-Palmer, EW-96410-13)插入光纖電纜。將這個橡（xiàng）膠管（guǎn）係（xì）緊（jǐn），同時仍然允許調整光纖電纜。將矽膠管緊（jǐn）密地插入套管的魯爾端，固定光纖電纜（lǎn）在套管內的位置。調整（zhěng）光（guāng）纖電纜的位置，使其（qí）在套管尖端前方約4毫米處穿（chuān）過套管。

圖1.如圖所示，光纜插入矽（guī）橡膠塞中，與其相對的（de）另（lìng）一端（duān）緊綁著一（yī）小段矽橡膠管。

圖2.圖片展示了橡膠塞與光源的連接（jiē），光纖的另一端（duān）穿過插（chā）管導管。左側還（hái）展示了一（yī）個簡單的支架，用於在插管過程中固定小鼠。

2、將麻醉後的小鼠放置在垂直支架上，由其上切牙懸掛(圖3)。大（dà）多數研究者發現（xiàn），當小鼠的腹側（cè）麵向自己時，視覺效果最佳。非常（cháng）輕柔地拔（bá）出舌頭，用拇指和食指握住。中（zhōng）指放在頸部和塑料支架之間。利用食指和拇指對舌頭的牽引開（kāi）啟口腔，並用頸部後方的中（zhōng）指調整頭（tóu）部的角度，使插（chā）管路徑伸直，如圖3所示。

圖3.兩個視角展示了準備插管（guǎn）的（de）小鼠位置

3、使用光纖電纜作為光源和導入器，推動它（tā）通過（guò）可視化聲帶。如果看不到聲帶，可以（yǐ）通過中指作為支點，輕輕用（yòng）力拉舌頭。插入後，將套管再向前推進（jìn）約5 mm。然後，小心不要移（yí）動套管，拔出光纖電纜。將小鼠平躺（tǎng）下來，用膠（jiāo）帶（dài）固（gù）定導管，並用橡皮（pí）泥(塑型黏土)支撐導管接頭，如（rú）圖4所（suǒ）示。

圖4。此圖展示了一隻準備通氣的已插管小（xiǎo）鼠。圍繞嘴部的膠帶有助於防止導管移動（dòng）。一小塊橡皮泥(建模黏土（tǔ）)提供了一個便利的支撐點，用於固定導管接頭與呼吸機的連（lián）接。

4、步驟3中的操作不容（róng）易（yì）演示或（huò）教學，因為這是一個單獨的操作。然而，通過對舌頭（tóu）的牽引力和頭部後麵的支（zhī）撐的微妙調整，幾乎所有嚐試這種方法的人都會很快找到正確的方式（shì）來調整小（xiǎo）鼠的位置，使聲帶可視化。

總結

本文描述的方法有幾（jǐ）個優點。首先，裝置簡單且價格低廉。製作裝置不需要任何特殊工具或昂貴的設備。在實（shí）踐中，對於從未嚐試過插管（guǎn）的研究員、學生和技術人員來說更容易（yì）掌（zhǎng）握（wò）。

在進行（háng）插管時，有（yǒu）幾個實際問題需要（yào）提及。在最初打開小鼠口腔時，盡量輕柔拉舌頭非（fēi）常重要（yào）。如果（guǒ）使用無保護鉗（qián），很容易損傷舌頭（tóu），這可能導致小鼠死亡。在首次學習如何插（chā）管時，最重要（yào）的是使用頸部後（hòu）方的手指來調整頭部角度，以使氣管開口的可視（shì）化。如果操作正確，對舌頭進行（háng）足夠的牽拉，很容易看到聲帶。最初的可視化步驟（zhòu）通常需要最多的時間，因為（wéi）一（yī）旦（dàn）看到氣管開口，插（chā）入纖（xiān）維電纜和靜脈導管就相對簡（jiǎn）單了。

總之，本文描述的插管（guǎn）方（fāng）法製作成本低，使用簡單，可以令大多數研究人員和（hé）實（shí）驗室技術人員在相對較少的經驗下快速掌握小鼠插管（guǎn）技術。