血生化檢測

血生化檢測是對實驗動物血液內離子、脂類（lèi）、蛋白質和各種（zhǒng）酶等物質濃度的檢測。這些檢測項目的變化一般都與特定器（qì）官的功能有關，對評估實驗（yàn）動物健康狀態以（yǐ）及驗證實驗動物造模是否成功等，都具（jù）有重要（yào）指導（dǎo）意義。由於血生化涉及項目較多，本（běn）號將分兩篇對其進（jìn）行介紹。

絕大多數血生化檢（jiǎn）測都可以用血清或肝素血漿樣本檢測，兩者的檢測結果會有差（chà）異，但這（zhè）種差異並無臨（lín）床意（yì）義。然而，對於需要長期監測（cè）動物，相同指標應在監測周期內（nèi）選擇相同樣本進行檢（jiǎn）測（cè）。樣本的（de）保存和抗凝（níng）劑的使用（yòng）均應根據不同的檢測項目進行選擇。此外（wài），樣本采集（jí）的質量可直接影響檢測結果。

對（duì）於大多數血生化項目，樣本應在（zài）采集後及時（shí）檢測，如不能及時檢測，3天（tiān）內可（kě）4℃或冷凍（-20℃或更低溫度）保存；若保存時長超出3天，需冷（lěng）凍（-20℃或更低溫度）保存，切忌將樣本反複凍融後進行檢測。但一些生化項（xiàng）目低溫保存也會影響其活性，如乳酸脫氫酶和穀草轉氨酶。

尿素、鉀（jiǎ）、鈉離子（zǐ）避免使用含銨（ǎn）鹽類抗凝劑（jì）進行檢測；穀丙轉氨（ān）酶（méi）、肌酸激酶和（hé）總蛋白避免使用枸櫞酸鈉抗凝劑進行檢測。本文僅列出部分生化項的抗凝劑選擇，更多信息可參考WHO 2002年發布（bù）的《實驗室（shì）檢查中抗凝劑的使用》。

齧（niè）齒動物尤其實（shí）驗大小鼠的血生化參考範（fàn）圍，目前仍沒（méi）有建立標準參考。這與實驗大小鼠的（de）品係眾多有關。已有文獻證明，不（bú）同品係的（de）小鼠血生化會有差異。並且（qiě）血生（shēng）化的結果與動物的年齡（líng）和性別等因素相關。另外，由於不（bú）同機構使用的檢測方法不（bú）同，如幹式生化（huà）分析儀和濕式生（shēng）化分析儀，且使用試劑盒品牌不同、試劑盒檢測原理不同等，均會導致結（jié）果不同。這些（xiē）因素都導致了實驗大小鼠（shǔ）的血生化標準參考範圍無法建立，目前（qián）可查到的參考範圍，均應根據內部情況進（jìn）行參考。

蛋白質與肝膽功能（néng）檢測

1.   總蛋白（bái）（Total protein, TP）

血液等體液中的蛋白質種類（lèi）眾多，但目前尚無一（yī）種常規檢測技術可以對（duì）體液（yè）中各種類型蛋白質總量進行準確測定。因此，臨床對體液中總蛋白質測定通常是（shì）假設（shè）所有的體液蛋白質均是單純蛋白質，且各種體液蛋白與化學試劑（jì）的反應性均一致。基於以上兩個假設，目前測定（dìng）總蛋（dàn）白最常用的方法（fǎ）有雙縮脲法和紫外分光光度法。血清中的總（zǒng）蛋白實際檢測的是除纖維蛋白原以外的成分，因此用血漿測定總蛋白較血清測定值偏高。

總蛋白（bái）的濃度主要反應（yīng）肝髒合成（chéng）功能和腎（shèn）髒病變造成蛋白質丟失情況（kuàng），可以用來（lái）判斷機體的水合狀態，脫水的動物總（zǒng）蛋白濃度會相對升高，即高蛋（dàn）白血症。當動（dòng）物出現慢性肝（gān）髒疾病、骨髓瘤、自身（shēn）免疫性疾病、慢性炎症和感染等（děng），會導致TP和球蛋白同時升高。

過度水（shuǐ）合動物總蛋白濃度（dù）會相對降低，即低蛋白血症，此時動物（wù）可能（néng）會出現浮腫、胸腔或腹腔積液。TP和白蛋白同時降低常見於肝功能受損導（dǎo）致蛋白（bái）質合成減少、營養不良、蛋白丟失過多、消耗增加等病理性因素。

2.   白蛋白（bái）（Albumin, ALB）

ALB由（yóu）肝實質   細胞合成分泌，是血漿中含量最多的蛋白質，大部分動物（wù）的白蛋白（bái）占血漿蛋白的35%~50%。ALB是動（dòng）物機體內重（chóng）要的營養蛋白（bái），參與維持內環境穩定，也是（shì）血漿中多種物（wù）質的主要轉運蛋白。當出現炎性疾病（bìng）、漿細（xì）胞瘤、淋巴瘤、腎小球腎炎、營養（yǎng）不良、過度水合等，均會（huì）導致齧齒動物出現血（xuè）清白蛋白的降低；ALB升高則多見於脫（tuō）水動物。

3.   球蛋白（Globulin，GLB）

球（qiú）蛋（dàn）白可以分為α球蛋白、β球蛋白和（hé）γ球蛋白，大多數α球蛋白和β球蛋白由（yóu）肝髒合成，γ球蛋白由漿細胞合成。α球蛋白中比較重要的兩種蛋白質分（fèn）別是高密度脂蛋白（bái）和極（jí）低密度脂蛋白；β球蛋白包括補體（tǐ）（C3、C4）、轉鐵（tiě）蛋白和鐵蛋白；γ球蛋白（即（jí）免疫球蛋白）包括IgG、IgD、IgE、IgA和IgM。

球蛋白的（de）濃度一般通過總蛋（dàn）白與白（bái）蛋白的差值來進行（háng）計算。球蛋白減少主要由於合（hé）成減（jiǎn）少，如使用免疫抑製劑；球（qiú）蛋白的增加多見於γ球蛋白，常見原因有慢性肝髒疾病、免疫性疾病、骨髓瘤等。

4.   白（bái）蛋白/球（qiú）蛋白（bái）（A/G）

白球比應結合蛋白質指標進行分析，不（bú）同種類、品係（xì）、年齡、性別動物的白球比都有差異，很多（duō）病理狀（zhuàng）態會改變白球比。當白蛋白（bái）和（hé）球蛋白均變化時，如出血導致白蛋（dàn）白和球蛋白丟失、脫水導致球蛋白和（hé）白蛋白增加時，A/G比（bǐ）值將變化不大（dà）或保持在正常範圍內；當其中一個數（shù）值發生變化且占主導時，那麽A/G比值將發生異常（cháng），如免疫球蛋白的產生導致A/G比值（zhí）降低、免（miǎn）疫球蛋白缺乏導致A/G比（bǐ）值增高（gāo）。在臨床上，ALB、TP、GLB和（hé）A/G比值應結（jié）合一起進行分析。

5.   穀丙轉氨酶（Alanine aminotransferase, ALT）

臨床上廣泛用來作為肝（gān）細胞損傷指標（biāo），也是中間（jiān）代謝的（de）關鍵酶。ALT主要存在於肝髒（zāng），但也廣泛存（cún）在於腎髒、心肌、骨骼肌、胰（yí）腺等組織中，這些組織出現損傷或壞死，也會導致血清ALT水平升高。由於ALT主要存在於細胞質，釋放比較容易，因此ALT升高可出現在組織損傷早期。血液中ALT的水平與肝損傷的嚴重程度不呈現相關性，ALT通常會在肝損傷（shāng）12h內升高，並在24~48h內達到峰值，除非存在慢（màn）性肝損傷，一（yī）般情況下血清（qīng）ALT水（shuǐ）平會在幾周內恢複（fù）正常。比（bǐ）較特殊的是，豚鼠中ALT活性較低，因此ALT不適合用來作為（wéi）判斷其肝損傷的標誌物。

目前已發現在人類、大小鼠（shǔ）和（hé）狗（gǒu）中，ALT具有兩種亞型，分別（bié）為ALT1和ALT2，其中ALT1主要在腎髒、肝髒、脂肪和心組織中表達；而ALT2主要在肌肉和脂肪中表達。在小鼠中，ALT2被認為是脂肪變性的標誌物。ALT亞型的區分（fèn）可以更精準反應器官損傷情況，但目前ALT分（fèn）型的檢測尚未廣泛應用在實驗動（dòng）物檢測中。

6.   穀草轉氨酶（Aspartate aminotransferase, AST）

AST主要存在於肝（gān）細（xì）胞內，在（zài）正常大鼠血清中，細胞質中的AST約占總AST活性82%，線粒體膜上的（de）AST約占總（zǒng）AST活（huó）性18%。此外，AST也存在於其他組織中，如心髒、骨骼（gé）肌、腎髒（zāng）、胰腺等，這些組織損傷或壞死時，血清中AST也（yě）會升高。AST水平（píng）升高（gāo）表示非特異性肝髒損傷，齧齒動物在應激狀態或肌內（nèi）注射也可能導致AST升高，AST升高應先檢（jiǎn）查血清或血漿樣本是否溶血，結合肌酸激酶水平，排除（chú）是否為肌肉損傷導致AST升高，上述原因排除後，方可考（kǎo）慮為肝損傷（shāng）導致AST升高。

7.   堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase, ALP）

ALP是一組在酸性條件下水解（jiě）磷酸（suān）單酯類化合物的酶（méi），在（zài）許多組織中存在其同工酶，尤其是肝膽係（xì）統、骨骼內的成骨細胞、軟骨（gǔ）內的成軟骨細胞、腸道（dào）細胞。ALP水（shuǐ）平與齧齒類動物的年齡及性別（bié）具有相關性，處於（yú）生長期的未成年動物ALP水平較高，隨著動物年齡的增長，ALP水平明顯降低；且大多數雌性動物ALP水平低於雄（xióng）性動物。而ALP的病理性（xìng）升高則常見於發（fā）生（shēng）肝膽疾病、骨骼疾病、惡性腫瘤時的動物。

8.   γ-穀（gǔ）氨酰轉（zhuǎn）移酶（Gamma-glutamyltransferase, GGT）

GGT存在於許多組織中，包括腎髒（zāng）、胰腺、腸道和肌細胞。GGT升高（gāo）多見於動物發生肝髒疾病、膽管阻塞以及急性胰腺炎等（děng）。需要注意的是，GGT在腎髒中濃（nóng）度最高，但發生腎髒疾病時，GGT的增加並不明顯，這是因為GGT會從受損的管狀上皮細胞中釋放到尿液中，而不是血（xuè）液中。

9.   膽紅（hóng）素（Bilirubin, Bil）

膽紅素（sù）是一（yī）種（zhǒng）不可溶性分子，由脾髒內巨噬細胞降解血紅（hóng）蛋白產生，是各種含血紅素蛋白中的血（xuè）色素在一些係列酶作用下的（de）降解（jiě）產（chǎn）物，與脂類的消化吸收及黃疸（da）形成具有重要關係。膽紅素在光照下分解，因此，樣本應避光保存以保證結果準確性。當動物出現膽汁運輸（shū）障礙或腸道吸（xī）收不（bú）良時，會導致膽紅素降低；當動物出現溶血性疾病導致紅細胞破壞或內出血時，可使膽紅素含量增高。

10.  膽汁酸（Bile acids, TBA）

齧齒動（dòng）物的膽汁酸代謝與人類有所不同，大小鼠的膽汁酸以膽固醇為（wéi）原料在肝細胞中合成，由肝源性分（fèn）子（zǐ）組成，並主要與牛磺酸結（jié）合。膽汁酸可（kě）以促進脂類的消化吸收、調節膽固醇的代謝以及促（cù）進膽汁分泌。當動物出現肝（gān）功能受損、膽道阻塞（sāi）等疾病時，均會（huì）導致膽汁酸水平增加。

腎髒功能檢測

1. 尿素（sù）（Urea）

尿素是哺乳動（dòng）物蛋白質代謝的（de）主要終末（mò）產物，可自（zì）由濾過腎小球，當腎實質受損時，腎小（xiǎo）球濾過（guò）率下降，血尿素濃度會升高（gāo），因此（cǐ）可以通過測定尿素水平來評估腎功能。需要注意的是（shì），產尿酶菌（如金黃色葡萄球（qiú）菌/變形杆菌屬/克雷伯菌屬）汙染的血液樣本可導致尿素分解，導致尿素水平下降，為避免這種情（qíng）況，樣本采集後應及時進行檢測，如不能及時檢（jiǎn）測，應將樣本放置在冰箱（xiāng）冷藏中保（bǎo）存。另外不同性別及年（nián）齡差異，也會（huì）影響尿素水平（píng），隨著動（dòng）物年（nián）齡增長，尿素水（shuǐ）平會（huì）呈（chéng）現下降趨勢（shì）。尿素的增加多見於高（gāo）蛋白飲食、脫水以及腎功能（néng）衰竭等。

2. 肌（jī）酐（Ceatinine, Crea）

血肌酐經（jīng）腎小球濾過進（jìn）入原尿，並（bìng）且不被腎小管重新吸收，機體內肌酐（gān）應保（bǎo）持恒（héng）定，因此測定血肌酐水（shuǐ）平可以用來評估腎功能。但是和尿素一樣，肌酐不是腎功（gōng）能的準確指標，當腎功能損傷近75%時，方可引起血肌酐水平升高。肌酐降低則多見於（yú）動物營養不良、貧血等。

3. 尿酸（Uric acid, UA）

尿酸（suān）是嘌呤堿基代（dài）謝產物，主（zhǔ）要存在於肝髒中，小部分可經肝（gān）髒隨膽汁排泄。尿酸可自由濾（lǜ）過腎小球，也可腎小管排泄。因此（cǐ），排（pái）除外源性尿酸幹擾，血尿酸可反映腎小球濾過功能和腎小管重吸（xī）收功能。當機體（tǐ）出現（xiàn）急性或慢性腎炎、多發性骨髓瘤等均（jun1）會導致UA升高；肝髒壞死、肝功能衰竭等（děng）病理原因則（zé）會導致UA降低。